ADPtest
Transkript
ADPtest
06673686001V2 ADPtest REF 06675786 REF 06675794 190 190 1 x → 1.0 mL 3 x → 1.0 mL Sulandırılmış reaktifin stabilitesi: 2-8 ℃’de -20 ℃’de 18-25 ℃’de bir kere çözdürdükten sonra Türkçe Kullanım amacı Trombosit adenozin difosfat (ADP) reseptörlerinin uyarılmasının ardından trombosit fonksiyonunun kantitatif in vitro tayini için test çalışmasıdır. Reaktif Multiplate analizöründe tam kan numuneleri ile trombosit agregasyon testinde kullanım içindir. Özet Adenozin difosfat (ADP) trombositlerin yoğun granüllerinde saklanan bir nükleotiddir. Aktivasyondan sonra, trombositler şekil değişikliği geçirir ve alfa ve yoğun granüllerinin içindekileri serbest bırakır. Yoğun granüllerden iç ADP stoklarının serbest kalması trombosit membranları üzerindeki purinerjik reseptörlere, P2Y1 ve P2Y12’ye bağlanarak dolaşımdaki lokal serbest trombositleri aktive etmesine ek olarak yapışmış trombositlerin aktive edilmesini de sağlar. Trombositler aktive edildiğinde, trombosit membranı üzerindeki glikoprotein αIIbβ3 (GPIIb/IIIa) reseptörlerinin tek tek bileşenleri konformasyonlarını fiziksel olarak değiştirerek yüksek afiniteli fibrinojen bağlanma yerini GPIIb/IIIa oluşturur. Hem dolaşımdaki hem de alfa granüllerinden salgılanan fibrinojen sonradan GPIIb/IIIa reseptörlerine bağlanarak trombosit-trombosit köprülerini oluşturup trombosit agregasyonuna yol açar.1 ADP’nin neden olduğu trombosit agregasyonu Glanzmann trombasteni veya tienopiridin alan kişilerde azalabilir veya olmayabilir.2,3,4 Trombosit agregasyonu sonuçta GPIIb/IIIa – fibrinojen köprülerinin oluşmasına bağlı olduğu için, anti-GPIIb/IIIa ilaçları ADP’nin neden olduğu agregasyon yanıtını azaltabilir veya ortadan kaldırabilir.5 Test prensibi ADPtest reaktifi, trombositlerin ADP reseptörleri aracılığıyla trombosit aktivasyonunu tetikleyen ADP içerir. Multiplate Test Cell’de aktive edilmiş trombositler sensör tellerine bağlanıp bunların üzerinde agregasyon gösterir. Bu, sensör telleri arasında direncin artmasına yol açar ve bu direnç sürekli olarak kaydedilip keyfi birimlerde (AU*dak veya U; çevrim: 1 U = 10 AU*dak) eğri altında alan (AUC) ile ifade edilir.4 ADPtest testi P2Y12 reseptörünün inhibisyonunun4,6,7 yanı sıra GpIIb/IIIa reseptörünün inhibisyonu veya olmamasına duyarlıdır.2,5,8 Reaktifler - çalışma solüsyonu REF 06675786190 R1: 1.0 mL’lik 1 flakon Adenozin difosfat içeren liyofilize reaktif: 0.2 mM. Alikotlama için 5 mikro test tüpü. REF 06675794190 R1: Her biri 1.0 mL’lik 3 flakon Adenozin difosfat içeren liyofilize reaktif: 0.2 mM. Önlemler ve uyarılar In vitro tanıda kullanım için. Tüm laboratuvar reaktiflerinin kullanılmasında gerekli olan genel önlemleri uygulayın. Tüm atık malzemelerin atılması yerel yönetmeliklere göre olmalıdır. Profesyonel kullanım için talep edildiğinde güvenlik veri formu mevcuttur. Reaktif kullanımı Bir R1 flakonunun içindekileri 1.0 mL distile veya deiyonize su ekleyerek dikkatle sulandırın. R1’i yavaşça karıştırın ve flakonu kapalı olarak 18-25 ℃’de 10 dakika bekletin. Kullanmadan önce, homojen bir solüsyon elde etmek için flakonu dikkatle döndürün. Köpük oluşmasını engelleyin. Solüsyon berrak ve renksiz olmalıdır. Not: Flakonlar vakum yerine soy gaz ile doldurulur. Sulandırdıktan sonra maksimum stabilite elde etmek için, günlük kullanım için reaktiften ≥ 100 µL’lik kısımları mikro test tüplerine pipetleyin ve uygun şekilde saklayın. 7 gün 4 hafta 24 saat Reaktifi ışık, hava veya yüksek sıcaklıklara maruz kalmaktan koruyun. Örnek toplama ve hazırlama Sadece aşağıda listelenen örnek test edilmiştir ve kabul edilebilir olarak bulunmuştur: tam kan. Numune toplamak için standart numune alma tüplerini kullanın ve gerekli üreticinin kullanım talimatlarına uyun. Kan toplama uzun süreli venöz stazdan kaçınılacak şekilde ve kan alımı sırasında uzun çaplı bir iğne kullanılarak dikkatle gerçekleştirilmelidir. Kan toplama tüpünde köpük oluşmasından kaçının. İçeriğin tamamen karıştığından emin olmak için toplama tüpünü yavaşça alt üst edin.9 Numuneleri dondurmayın veya buzdolabına koymayın. Kanda analizden önce ön ısıtma yapmayın.10,11 Kan numunesi toplama için kullanılan antikoagülan belirgin şekilde test sonuçlarını etkiler.10 Piyasada bulunan hirudin kan alma tüplerinin kullanılması önerilir.9 Alternatif olarak standart lityum-heparin tüpleri veya sitratlı tüpler (% 3.2 sitrat) kullanılabilir.6,12 Sitratlı kan toplama tüplerinin her zaman aşırı sitrat seviyelerinden kaçınmak için belirtilen dolum hacmine kadar doldurulduğundan emin olun. Heparin kan analiz edildiğinde, tienopiridinlerin izlenmesi için ADPtest HS (ADPtest + Prostaglandin E1 Reaktifi) testinin kullanılması önerilir. Heparin, ADPtest test çalışmasında tienopiridinler ile trombosit inhibisyonunu maskeleyebilecek belirli trombosit-aktive etme özelliklerine sahiptir.7 Tienopiridinlerin izlenmesine yönelik en geniş deneyim şu an için hirudin kan için mevcuttur.13,14,15 Kan toplama sistemi her merkezde standardize edilmelidir. Sadece aynı numune antikoagülanı (heparin, sitrat veya hirudin gibi) kullanıldığında tek bir numunenin sonuçlarının referans aralıklarla karşılaştırılması mümkündür. Numuneler kan toplandıktan sonra 0.5-3 saat içerisinde analiz edilmelidir.10 Kit içinde bulunan malzemeler • Reaktif için “Reaktifler - çalışma solüsyonu” bölümüne bakın. Gerekli malzemeler (kit içinde bulunmayan) • REF 06675689190, Aliquot Vials for ADPtest • REF 06675751001, Hirudin Blood Tubes, 50 tüp • REF 06675760001, Hirudin Blood Tubes, 10 tüp • REF 06675972190, NaCl/CaCl2 Solution • REF 06675930190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 1 x 0.5 mL • REF 06675948190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 3 x 0.5 mL • REF 06675891190, Prostaglandin E1 Reagent, 1 x 1.0 mL • REF 06675905190, Prostaglandin E1 Reagent, 3 x 1.0 mL • REF 06675590001, Test Cells, 6 x 10 adet • % 0.9 salin solüsyonu • Multiplate analizörü. Gerekli ilave malzemeler için analizörün kullanıcı kılavuzuna ve kısa talimat kılavuzuna bakın. • Distile veya deiyonize su • Genel laboratuvar cihazları Test Çalışması Test performansının en iyi durumda olması için, bu belge içerisinde ilgili analizör için verilen talimatları takip edin. Analizöre özgü test talimatları için uygun kullanıcı kılavuzuna bakın. Roche tarafından onaylanmamış uygulamaların performansı konusunda garanti verilmemiş olup, bunlar kullanıcı tarafından tanımlanmalıdır. R1 ve numuneleri belirlenmiş pozisyonlara yerleştirin. Saklama ve stabilite 2-8 ℃’de saklayın. Liyofilize reaktifler belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Sulandırılan reaktif mikro test tüplerinde kısımlara ayrılmazsa, orijinal flakon dik bir pozisyonda saklanmalıdır. 2012-10, V 2 Türkçe 1/3 Multiplate analizörleri ADPtest Hirudinize veya heparinize kan için test prosedürü: Salin solüsyonu, % 0.9 (önceden 37 °C’ye ısıtılmış) Numune (18-25 °C) İnkübasyon R1 Ölçüm süresi 300 µL 300 µL 180 saniye 20 µL 6 dakika Tekrarlanabilirlik Tekrarlanabilirlik, iki cihazda tüm kanallarda (ör. toplamda 10 ölçüm) hirudinize tam kan numunesinin ölçülmesiyle belirlenmiştir. Ortalama, standart sapma ve varyasyon katsayısı hesaplanmıştır. Test çalışması her numunede aynı cihazlar ve reaktif flakonları kullanılarak toplam üç kan numunesinde gerçekleştirilmiştir. Aşağıdaki sonuçlar elde edilmiştir: Numune Numune 1 Numune 2 Numune 3 Sitratlı kan için test prosedürü: NaCl/CaCl2 solüsyonu (önceden 37 °C’ye ısıtılmış) Numune (18-25 °C) İnkübasyon R1 Ölçüm süresi 300 µL 300 µL 180 saniye 20 µL 6 dakika Nihai konsantrasyon: 6.5 µM ADP. Sıcaklık koşulları ve inkübasyon sürelerine tam olarak uyulmalıdır. Elektronik pipet kullanırken Multiplate analizöründe gösterilen yazılım talimatlarına uyun. Kalite kontrol Trombosit agregasyon çalışmalarının sonuçları aynı anda test edilen normal numunenin agregasyon profillerinin sonuçlarına göre yorumlanmalıdır. GpIIb/IIIa Antagonist Reaktifi veya Protaglandin E1 Reaktifinin eklenmesiyle anormal (inhibe edilmiş) agregasyon elde edilebilir.4 Sınırlamalar - interferanslar Çeşitli ilaçlar ve bitkisel tedavilerden sonra bozulmuş trombosit fonksiyonu bildirilmiştir.16 Trombositopeni olan hastalarda agregasyon anormal olabilir.17 ADPtest, siklooksijenaz inhibisyonu ve ilişkili ilaçlara karşı duyarlılık hiç göstermemekte veya çok az göstermektedir.18 Önceden ısıtılmamış salin solüsyonunun kullanılması veya daha kısa inkübasyon sürelerinin uygulanması yanlış sonuçlara neden olabilir. Salin solüsyonu metil ester gibi katkı maddeleri içermemelidir. Bu yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir. Numunede GpIIb/IIIa antagonistlerinin olması zayıf agregasyona yol açabilir.4 Klopidogrel veya diğer tienopiridin ilaç tedavileri ve numunede direkt ADP reseptör antagonistlerinin olması daha zayıf agregasyon yanıtlara yol açabilir.18 Tanı amacıyla, sonuçlar her zaman hastanın tıbbi öyküsü, klinik muayenesi ve diğer bulgularla birlikte değerlendirilmelidir. Beklenen değerler Hirudin Kan tüpleri kullanılarak 53 sağlıklı donör ile yapılan bir çalışmada normal değerler belirlenmiştir. Sonuç (5.-95. persentil): AUC [U] ADPtest 57-113 Not: Referans değerlerin belirlenmesi için normal donör test çalışmasından önceki 10 gün içerisinde asetilsalisilik asit, klopidogrel veya klopidogrel ya da asetilsalisilik asit içeren bileşikler almamalıdır.19 Her laboratuvar beklenen değerlerin kendi hasta popülasyonuna taşınabilirliğini incelemeli ve gerekiyorsa kendine ait referans aralıkları belirlemelidir. Spesifik performans verileri Multiplate analizöründen alınan örnek performans verileri aşağıda verilmektedir. Ayrı ayrı laboratuvarlardan elde edilen sonuçlar farklılık gösterebilir. Multiplate analizörleri Ortalama AUC [U] 96 100 90 SD AUC [U] 4 7 3 CV %4 %7 %3 Kaynaklar 1. Ruggeri ZM. Platelets in atherothrombosis. Nat Med 2002; 8:1227-1234. 2. Halimeh S, Angelis G, Sander A, et al. Multiplate Whole Blood Impedance Point of Care Aggregometry: Preliminary Reference Values in Healthy Infants, Children, and Adolescents. Klin Padiatr 2010; 222: 158-163. 3. Bernlochner I, Morath T, Brown PB, et al. A prospective randomized trial comparing the recovery of platelet function after loading dose administration of prasugrel or clopidogrel. Platelets 2012 Feb 28. 4. Sibbing D, Braun S, Jawansky S, et al. Assessment of ADP-induced platelet aggregation with light transmission aggregometry and multiple electrode platelet aggregometry before and after clopidogrel treatment. Thromb Haemost 2008; 99: 121-126. 5. Desch S, Siegemund A, Scholz U, et al. Platelet inhibition and GP IIb/IIIa receptor occupancy by intracoronary versus intravenous bolus administration of abciximab in patients with ST-elevation myocardial infarction. Clin Res Cardiol 2011 Oct 21. 6. Velik-Salchner C, Maier S, Innerhofer P, et al. Point-of-care whole blood impedance aggregometry versus classical light transmission aggregometry for detecting acetylsalicylic acid and clopidogrel: the results of a pilot study. Anesth Analg 2008 Dec;107(6):1798-806. 7. Calatzis A, Rahe-Meyer N, Theisen F, et al. Detection of acetylsalicylic acid and clopidogrel using multiple electrode aggregometry. European Journal of Anaesthesiology, V24, June 2007, p 67. 8. Awidi A, Maqablah A, Dweik M, et al. Comparison of platelet aggregation using light transmission and multiple electrode aggregometry in Glanzmann thrombasthenia. Platelets 2009 Aug; 20(5):297-301. 9. CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline. CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008. 10. Kaiser AF, Neubauer H, Franken CC, et al. Which is the best anticoagulant for whole blood aggregometry platelet function testing? Comparison of six anticoagulants and diverse storage conditions. Platelets 2011 Oct 14. 11. Behr T, Behr W, von Scheidt W. Monitoring of clopidogrel treatment by multiplate electrode platelet aggregometry. J Lab Med 2010, 34(2), 99-107. 12. Djukanovic N, Todorovic Z, Obradovic S, et al. Abrupt Cessation of One-Year Clopidogrel Treatment Is Not Associated With Thrombotic Events. J Pharmacol Sci 2011;117(1):12-8. 13. Sibbing D, Braun S, Morath T, et al. Platelet reactivity after clopidogrel treatment assessed with point-of-care analysis and early drug-eluting stent thrombosis, J Am Coll Cardiol 2009 Mar 10;53(10):849-56. 14. Siller-Matula JM, Christ G, Lang IM, et al. Multiple electrode aggregometry predicts stent thrombosis better than the vasodilator-stimulated phosphoprotein phosphorylation assay. J Thromb Haemost 2010 Feb;8(2):351-9. 15. Sibbing D, Steinhubl SR, Schulz S, et al. Platelet aggregation and its association with stent thrombosis and bleeding in clopidogrel-treated patients initial evidence of a therapeutic window. J Am Coll Cardiol 2010 Jul 20;56(4):317-8. 16. CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline. CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008, p.31. 17. Hanke AA, Roberg K, Monaca E, et al. Impact of platelet count on results obtained from multiple electrode platelet aggregometry (Multiplate). Eur J Med Res 2010 May 18;15(5):214-9. 18. Penz SM, Bernlochner I, Tóth O, et al. Selective and rapid monitoring of dual platelet inhibition by acetylsalicylic acid and P2Y12 antagonists by using multiple electrode aggregometry. Thromb J 2010 May 13;8:9. 2/3 2012-10, V 2 Türkçe 06673686001V2 ADPtest 19. CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition. CLSI document C28-A3. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008. Daha fazla bilgi için, lütfen ilgili analizörün kullanıcı kılavuzu ve kısa talimat kılavuzuna, ilgili aplikasyon sayfaları, ürün bilgisi ve gerekli tüm bileşenlerin Yöntem Sayfalarına bakın. Bu Yöntem Sayfasında, ondalık sayının tam sayı ile kesirli kısmı arasındaki sınırı belirleyen ondalık işaret olarak nokta kullanılmaktadır. Binlik işaret ise kullanılmamaktadır. Önemli eklemeler veya değişiklikler sayfa kenarındaki değişiklik çizgileri ile belirtilmektedir. © 2012, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com 2012-10, V 2 Türkçe 3/3 Multiplate analizörleri