m44 mıcrogen® e.colı 0157
Transkript
m44 mıcrogen® e.colı 0157
M44 MICROGEN® E.COLI 0157 M44 MICROGEN®E. coli 0157; insan fekal örnekleri veya gıda örneklerinin seçici besiyeri kültürlerinin E. coli 0157 serogrubu için identifikasyon doğrulaması amacıyla geliştirilmiş latex slide aglütinasyon testidir. Kit, E. coli 0157 serogrubunun diğer E. coli serotiplerinden ve fekal örnekteki diğer mikroorganizmalardan hızlı bir şekilde ayrımını gerçekleştirir. ÇALIŞMA PRENSİBİ Latex parçaları, E. coli 0157 serogrubuna ait somatik ( hücre duvarı) lipopolisakkarit 0157 antijenine karşı reaksiyon gösteren antibodyler ile kaplanmıştır. E. coli 0157 antijenlerini içeren bakteriyal süspansiyon, duyarlı antibodyler ile kaplı latex partiküller ile karıştırıldığında aglütinasyon sonucu çökelti oluştuğu gözlenmektedir. KİT İÇERİĞİ M44a Test Latex Reagent M44 E. coli 0157’ye duyarlı tavşan antibodyleri ile kaplı latex parçaları 2.5mL (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) ( Mavi Kapak) M44b Control Latex Reagent 2.5mL E. coli 0157’ye reaksiyon göstermeyen (spesifik olmayan) tavşan antibodyleri ile kaplı latex parçaları (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) (Siyah Kapak) M40 % 0.85 İzotonik (Saline) Tuz Çözeltisi 5 mL (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) ( Beyaz Kapak) Kullanım Talimatı Disposable Aglütinasyon Slideları Disposable Karıştırıcı Çubuklar KİT İÇERİĞİNE İLAVE EDİLECEKLER • Bakteriyal öze • %1’lik D-sorbitol içeren (lactose yerine) MacConkey Agar ( Sorbitol MacConkey Agar ) ile hazırlanmış petriler. ÖRNEK HAZIRLAMA Hasta numunelerinden (kanlı dışkı örneği), Sorbitol MacConkey Agar (lactose yerine %1’lik D-sorbitol içeren) bulunan petrilere inokülasyon yapınız. 35-37 °C’de 18-24 saat aerobik koşullarda inkübe ediniz. E. coli 0157:H7 toksigenik suşları diğer E.coli suşlarından morfolojik açıdan farklı olarak renksiz koloniler ( sorbitol fermente edemeyen koloniler) şeklinde gözlenirler. Test için E. coli 0157:H7 morfolojisindeki kolonileri seçiniz. E. coli 0157:H7 morfolojisine benzerlik gösteren E. hermani ve P.stuartii gibi türlerin de bu besiyerinde büyüyebilme ihtimalini unutmamak gerekir. PROSEDÜR REAKTİF KONTROL MICROGEN®E. coli 0157 Test Latex Reagent’dan ( M44a) (Kit içerisinde mevcut) ve Control Latex Reagent’dan (M44b) (Kit içerisinde mevcut) slide üzerinde iki ayrı kuyuya 1’er damla damlatınız. Her iki kuyudaki reaktifler üzerine 1 damla tuz çözeltisi (M40) (saline) (Kit içerisinde mevcut) ilave ediniz. Her bir kuyu için ayrı karıştırma çubuğu kullanarak reaktif ve tuz çözeltisini karıştırıp, kuyu içerisine yayınız. Slide’ı hafifçe sallayıp, 30 saniye bekletiniz. Süre sonunda aglütinasyon gözlenir ise reaktiflerden en az biri veya tuz çözeltisi kontamine olmuş demektir ve yeni kit kullanılmalıdır. POZİTİF KONTROL Test slide üzerinde iki ayrı kuyuya E. coli 0157 olduğundan emin olunan örnekten Test Prosedüründeki gibi emülsiyon oluşturunuz. Slide’ı hafifçe sallayıp, 30 saniye bekletiniz ve otoaglütinasyonu gözleyiniz. Oto-aglütinasyon gözlenmiyorsa, emülsiyon bulunan bir kuyuya Test Latex Reagent’dan ( M44a) 1 damla, diğer bir kuyuya Control Latex Reagent’dan (M44b) 1 damla damlatınız. Damlalığı slide üzerine değdirmeyiniz. Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakika bekletiniz ve aglütinasyonu gözleyiniz. Test latex reaktifi ile aglütinasyon gözlenmeli, fakat kontrol latex reaktifi ile aglütinasyon gözlenmemeli. Eğer beklenen sonuçlar elde edilemiyorsa, reaktifler bozulmuş veya kontamine olmuştur ve yeni kit kullanılmalıdır. TEST PROSEDÜRÜ 1. İzotonik tuz çözeltisinden (M40) (saline) Microgen® aglütinasyon slide (Kit içerisinde mevcut) üzerindeki iki kuyuya 1’er damla(30 µl) damlatınız. 2. Steril öze ile Sorbitol MacConkey Agar kültüründen olası E. coli kolonilerini seçiniz. (Morfolojileri uygun renksiz kolonileri seçiniz.) 3. Tuz çözeltisi içerisinde iki ayrı kuyuda bakteriyal kültür ile ağır ve düz bir emülsiyon oluşturunuz ve kuyu içerisinde örneği yayınız. 4. Slide’ı hafifçe sallayıp, 30 saniye bekletiniz ve oto-aglütinasyon veya kümeşleme olup olmadığını kontrol ediniz. İstenen şekilde kümeleşme olmadan düz-yumuşak emülsiyon halini koruyorsa ADIM 5’e geçiniz. Eğer oluşturduğunuz emülsiyon “ipliksi” veya “taneli” görünüme sahip ise örnek, bu latex test için uygun değildir ve yanlış aglütinasyon sonucu verebilir. Bu durumda, alternatif başka bir testin uygulanması gerekmektedir. 5. Tüm latex reaktifleri ( M44a ve M44b) nazikçe karıştırarak homojen hale getiriniz. 6. Microgen®E. coli 0157 Test Latex Reagent’dan ( M44a) bakteriyal süspansiyon bulunan kuyulardan birine 1 damla ve bakteriyal süspansiyon bulunan diğer kuyuya Microgen®E. coli 0157 Control Latex Reagent’dan (M44b) 1 damla damlatınız. Damlalığı slide üzerine değdirmeyiniz. 7. Latex reaktifleri ve bakteriyal süspansiyonu her kuyu için ayrı karıştırma çubuğu ile karıştırınız ve kuyu içerisinde örneği yayınız. 8. Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakika bekletiniz. 2 dakika sonunda aglütinasyon sonuçlarını gözleyiniz. 9. Okuma sonrasında kullanılan tüm latex slidelar ve karıştırma çubuklarını atınız. YORUM Yorum Test Latex Control Latex Reaktifi ile Reaktifi ile + - E. coli 0157 vardır - - E. coli 0157 yoktur + + Spesifik olmayan aglütinasyon - +