Salisilat hidroksilaz yöntemi - XXVII. Ulusal Biyokimya Kongresi / 3
Transkript
Salisilat hidroksilaz yöntemi - XXVII. Ulusal Biyokimya Kongresi / 3
ÜÇ FARKLI YÖNTEMDE SALİSİLAT KONSANTRASYONUNA GÖRE İNTERFERANS DEĞERLENDİRİLMESİ Arzu ALYAKUT 04.11.2015 AMAÇ Salisilat (asetilsalisilik asit) en sık kullanılan antiinflamatuar ve antipiretik ilaçlardandır. Salisilat zehirlenmesi, çocuklarda ve yetişkinlerde yanlış kullanıma veya intihar girişimleri sonucu sık görülmektedir. Klinik laboratuvarlarda salisilat konsantrasyonunu ölçmek için birçok teknik kullanılmaktadır: kolorimetri yüksek gaz analjezik, ve florometri (en sık) performanslı likid kromatografi kromatografi ultraviyole floresan spektroskopi spektroskopi Effects of hemolysis and lipemia on the COBAS salicylate and acetaminophen assays compared to GDS assays. Meany D1, Schowinsky J, Clarke W. Clin Biochem. 2008 Dec;41(18):1486-8. Tüm bu yöntemler hemoliz, lipemi, ikter gibi interfere edicilerden farklı oranlarda etkilenebilmektedir. Bu çalışmada, farklı salisilat konsantrasyonlarına sahip örneklerde salisilat ölçümünün hemoliz, lipemi ve bilirubin interferans etkilerinin Ferrik EMIT nitrat yöntemi, (Enzyme multiplied immunoassay technique), Salisilat hidroksilaz yöntemleri karşılaştırılması amaçlanmıştır. üzerindeki etkilerinin Lippi G, Salvagno GL, Montagnana M, Brocco G, Guidi GC. Influence of hemolysis on routine clinical chemistry testing. Clin Chem Lab Med 2006; 44:311–6. GEREÇ VE YÖNTEM 10, 30, 100 ug/mL üç farklı konsantrasyonda havuzları oluşturuldu. Herbiri beş farklı konsantrasyonu içerecek şekilde hemoliz, bilirubin ve lipemi interferans çalışması için CLSI EP07-A protokolüne göre hazırlandı: Hemoglobin (0-500 mg/dL), Bilirubin (0-20 mg/dL) ve Trigliserid (0-3000 mg/dL) salisilat içeren serum Elde edilen sonuçlar, CLIA-88 kriterlerine göre ±%10 sapmaya kadar kabul edilebilir olarak değerlendirildi. Interference Testing in Clinical Chemistry;. Approved Guideline—Second Edition. CLSI EP7-A2 U.S. Dept. of Health and Human Services. Medicare, Medicaid, and CLIA Programs: regulations implementing the Clinical Laboratory Improvement Amendmenth of 1988(CLIA). Final Rule. Fed Regist 1992;57:7002-186. Ferrik nitrat yöntemi: Thermo Scientific cihazı ile Thermo Scientific® kiti, Salisilatın ferrik nitrat ile oluşturduğu demir kompleksinin 540 nm’deki absorbans ölçümü temeline dayanmaktadır. EMIT® yöntemi: Siemens viva E SYVA cihazı ile Siemens Emit® kiti, Emit® yöntemi (Enzyme multiplied immunoassay technique) homojen immun yöntem olup, 340 nm’de NAD’nin NADH‘a dönüşümünü ölçülmektedir. Salisilat hidroksilaz yöntemi: Roche Integra 400 plus cihazı ile Roche Cobas® kiti, Salisilatın ortamda NADH varlığında salisilat hidroksilaz ile katekol ve NAD’ye dönüşümünü 340 nm’deki absorbans azalması ile ölçülmektedir. BULGULAR GRAFİK 1. Hemolizin salisilat konsantrasyonu üzerine etkisi 1A. Hemolizin (0-500 mg/dL hemoglobin konsantrasyonlarının) 10 ug/mL salisilat düzeyine etkisi 1B. Hemolizin (0-500 mg/dL hemoglobin konsantrasyonlarının) 30 ug/mL salisilat düzeyine etkisi 1C. Hemolizin (0-500 mg/dL hemoglobin konsantrasyonlarının) 100 ug/mL salisilat düzeyine etkisi GRAFİK 2. Lipeminin salisilat konsantrasyonu üzerine etkisi A. Lipeminin (0-3000 mg/dL trigliserid konsantrasyonlarının) 10 ug/mL salisilat düzeyine etkisi B. Lipeminin (0-3000 mg/dL trigliserid konsantrasyonlarının) 30 ug/mL salisilat düzeyine etkisi C. Lipeminin (0-3000 mg/dL trigliserid konsantrasyonlarının) 100 ug/mL salisilat düzeyine etkisi GRAFİK 3. İkterin salisilat konsantrasyonu üzerine etkisi A. İkterin (0-20 mg/dL bilirubin konsantrasyonlarının) 10 ug/mL salisilat düzeyine etkisi B. İkterin (0-20 mg/dL bilirubin konsantrasyonlarının) 30 ug/mL salisilat düzeyine etkisi C. İkterin (0-20 mg/dL bilirubin konsantrasyonlarının) 100 ug/mL salisilat düzeyine etkisi TARTIŞMA ve SONUÇ Salisilat ölçümünde kullanılan yöntemler için interferans bilgilerinin bilinerek yola çıkılması yanlış hasta tedavisinin önüne geçmesi açısından değerlidir. Klinik laboratuvarlarda kullanılan yöntemler geliştirilirken interferans çalışmaları da yapılmakta ve bu bilgiler kullanıcılara sunulmaktadır. Ancak interferans çalışmaları genellikle analit düzeyleri belirlenmeksizin yapılmakta ya da üretici firmanın ilgili dökümanlarında analit konsantrasyonları genellikle yer almamaktadır. Çalışmamızda farklı düzeylerde salisilat içeren örneklerin farklı interfere edici ajanlarla değişen oranlarda etkileşimleri olabildiği saptanmıştır. İnterferans çalışmalarında kullanılan örneklerde ele alınan analitlerin konsantrasyonlarının çok önemli olduğu, Elde edilen bilgiler doğrultusunda farklı seviyelerde analit içeren örneklerle yapılan uygulamaların terapötik ilaç izleminde daha doğru sonuçlar sağlayacağı sonucuna varılmıştır. Bu çalışmanın devamında interfere edicilerin salisilatın toksik düzeyleri üzerindeki etkilerinin araştırılması planlanmıştır. Teşekkürler…